【文件速递】IDT gBlocks Gene Fragments助力鼓励宫颈癌筛查议论

宫颈癌是民众女性第四常见癌症。在畴昔的20年间，民众宫颈癌新发病例和物化病例数在不停加多。

高危型东说念主乳头瘤病毒 (HPV) 的抓续感染是宫颈癌的主要原因。高危型HPV的DNA检测被世俗招供为宫颈癌筛查最敏锐的次序，但由于检测老本腾贵，在资源有限的地区难以升迁。来自好意思国莱斯大学的Kundrod等东说念主在Science Translational Medicine发表一篇名为“An integrated isothermal nucleic acid amplification test to detect HPV16 and HPV18 DNA in resource-limited settings”的著述，先容了一种新的低老本且便携的HPV DNA检测次序，不错在资源匮乏的区域进行宫颈癌筛查。

✦ IDT家具亮点✦

议论东说念主员使用了IDT gBlocks Gene Fragments行为HPV检测考证的范例品。IDT提供高质地、高保确凿双链基因片断及基因，可用于各式职责经由及控制，如卵白质进化、基因构建和抗体工程等。

IDT有三种不同的线性双链DNA家具可供选择，用户不错字据相比信息选择更适合的家具：

✦ 议论配景✦

在2020年，约60.4万名女性被会诊出患有宫颈癌，约34.2万名女性死于宫颈癌。在高收入国度中，通过细胞学搜检和高危型HPV的DNA检测不错裁汰宫颈癌的发病率和物化率。但在中低收入国度中，由于检测平台的老本、对实验室确立、时刻东说念主员及生意化检测的需求等忙碌王人隔断了HPV DNA的检测。因此报复需要一种老本便宜且操作通俗的宫颈癌筛查次序。为了填补宫颈癌现场检测的空缺，并甘心固定的检测需求，议论东说念主员针对HPV16和HPV18（这两种病毒导致了民众约70%的宫颈癌）开辟了一种新式检测妙技。该检测依赖于重组酶团员酶扩增 (RPA, Recombinase polymerase amplification) ，一种等温扩增时刻，不错容忍传统的PCR过程中碰到的忙碌，从而减少对核酸提真金不怕火及纯化的需求。随后通过添加nfo酶进行RPA“nfo”检测。

Fig S1. RPA nfo检测旨趣。正向引物不带标签，探针和反向引物上带有两个不同的抗原标签。nfo酶会从nfo剪切位置截断，开释blocker，从而允许团员酶蔓延。正向和反向引物之间的扩增会产生唯有1个抗原标签的未剪切产物。而探针和反向引物间的扩增会产生带有2个抗原标签的剪切产物，从而通过侧向层析 (lateral flow sandwich assays) 进行测定。

✦ 议论次序 ✦

议论东说念主员在IDT埃德特合成了HPV 6、11、16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、72、82的E7基因gBlocks Gene Fragments，并从SiHa及HeLa细胞中提真金不怕火了HPV DNA。议论东说念主员使用上述的HPV DNA测试了RPA时刻纠合定制的NATflow兼容侧向层析条带的截止。并将圆善检测经由与NATflow平台整合，分别在高/低收入地区进行测试。

✦ 议论截止 ✦ 01-HPV16和HPV18 RPA检测的检测限低至每响应50-500拷贝，且不错灵验分裂HPV类型

Fig 1. HPV16和HPV18的多重RPA nfo响应的检测限及交叉响应性。(A) 使用生意化的侧向层析条带分别扩增和检测HPV16和HPV18的gBlocks合成DNA (HPV16：299bp，HPV18：328bp) 和SiHa (HPV16) 、Hela (HPV18) 细胞中提真金不怕火的DNA。(B) 和A雷同的条款下信号和配景的比值 (SBR) ，虚线为阳性阈值1.17。检测限为HPV16检测的50拷贝gBlocks合成DNA或SiHa细胞提真金不怕火的500拷贝DNA，HPV18检测为50拷贝的gBlocks合成DNA及HeLa细胞提真金不怕火DNA。(C) 和A雷同条款下的琼脂糖电泳，HPV18检测在侧向层析的检测限更低的部分原因是切割产物相对非切割产物更容易酿成。(D) HPV16和HPV18检测的特异性，竖直标签为HPV类型，水平标签为执行（HPV16或HPV18）及对照 (C) 。对每个列出的HPV类型，用106拷贝的gBlocks DNA进行扩增老到，唯有HPV类型正确时才不错看到阳性信息（虚线框出）。

02-样本制备：氨基肽酶 (ACP) 对细胞裂解灵验，且与RPA径直扩增兼容

在大无数宫颈癌筛查名目中，会使用宫颈阴说念拭子径直聚集细胞。使用ACP酶解次序需要的孵育时候最短，截止与超声法杰出，且处分赢得的粗细胞裂解物不错径直用于HPV16的RPA扩增。

Fig 2. 使用ACP进行样本制备。(A) qPCR检测SiHa细胞裂解后的HPV16 DNA肇始量。NTC：非靶向对照，NLC：未裂解对照，Sonication：超声法。(B) 使用RPA检测法分别检测NTC和ACP法裂解后的SiHa细胞HPV16 DNA。+：阳性对照。

03-定制的NATflow兼容侧向层析检测条带与生意化的侧向层析条带推崇杰出。

议论东说念主员将HPV扩增和侧向层析检测次序整合到了NATflow平台，发现每10微升响应中至少有1000筹谋拷贝时不错灵验检测。定制NATflow兼容侧向层析在室温下不错在一个月内保抓阳性。

Fig4. 对于SiHa和HeLa细胞提真金不怕火的DNA，NATflow平台整合后的扩增和检测情况。

04-使用NATflow分别在高收入地区和低收入地区使用患者提供的宫颈阴说念拭子样天职别检测HPV16和HPV18的DNA

在高收入地区，NATflow不错检测到大于500到1000拷贝的患者提供的宫颈阴说念拭子中的HPV16及HPV18 DNA。在低收入地区，NATflow和生意化侧向层析条带对于HPV16的检测莫得各异。而对HPV18的检测，生意化侧向层析条带的推崇略优于NATflow。

✦ 论断 ✦

议论东说念主员开辟并评估了一种HPV16和HPV18的DNA现场检测试剂盒。议论东说念主员暗示该试剂盒集成了样本制备、等温扩增和侧流检测，不错大范围分娩、自食其力且价钱便宜，操作过程神圣，仅需一丝用户门径。在高收入地区样本检测截止与参考HPV检测截止高度一致，在低收入地区样本检测截止和参考截止中度一致。

【参考文件】

Kundrod KA, Barra M, Wilkinson A, Smith CA, Natoli ME, Chang MM, Coole JB, Santhanaraj A, Lorenzoni C, Mavume C, Atif H, Montealegre JR, Scheurer ME, Castle PE, Schmeler KM, Richards-Kortum RR. An integrated isothermal nucleic acid amplification test to detect HPV16 and HPV18 DNA in resource-limited settings. Sci Transl Med. 2023 Jun 21;15(701):eabn4768. doi: 10.1126/scitranslmed.abn4768IF: 15.8 Q1 . Epub 2023 Jun 21. PMID: 37343083; PMCID: PMC10566637.

【对于IDT埃德特】

Integrated DNA Technologies, Inc.（IDT埃德特）是丹纳赫集团（Danaher Corporation，纽约证交所代码：DHR）生命科学平台旗下的一家运营公司。IDT埃德特悉力于面向生命科学界开辟、分娩并销售核酸家具，为学术与生意议论、农业、医疗会诊和药物开辟等规模提供撑抓。IDT埃德特开辟了多项针对基因组控制的专利时刻，涵盖二代测序、CRISPR基因组剪辑、合成生物学、数字 PCR以及RNA纷扰。通过GMP作事，IDT埃德特分娩的家具被科学家用于议论多种体式的癌症以及各样遗传性和传染性疾病。行为定制核酸分娩规模的优秀厂商，IDT埃德特为向上130,000名生命科学议论东说念主员提供作事。

IDT埃德特创立于1987年，其分娩总部位于好意思国爱荷华州科拉维尔，并在好意思国加利福尼亚州圣地亚哥、好意思国北卡罗来纳州三角议论园、比利时鲁汶以及新加坡等地设有分娩工场。更多信息请关爱“IDT埃德特”微信公众号或造访www.idtdna.com如有估量需求，接待致电IDT热线电话(400-668-3770) 或有关chinamarketing@idtdna.com

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